2020年12月4日,国家知识产权局公开了由湖北省农业科学院经济作物研究所朱志贤、于翠、董朝霞等人发明设计的专利-一种CRISPR/Cas9基因编辑体系的建立方法及其应用。
该发明包括以下步骤:sgRNA设计;CRISPR/Cas9‑Mmk1‑sgRNA载体的构建;转化并筛选阳性克隆;原生质体的制备;原生质体转化。本发明以CRISPR/Cas9技术为切入点,以桑椹缩小型菌核病菌Scleromitrula shiraiana为研究对象,利用CRISPR/Cas9载体系统,并构建菌核形成相关基因Mmk1相应的CRISPR/Cas9编辑载体,通过PEG介导的原生质体转化实现对S.shiraiana内源基因Mmk1的高效编辑,在桑椹菌核病菌中建立有效的CRISPR/Cas9基因编辑技术体系。
附图:
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